波浪袋方法—短暂转染大规模生产单克隆抗体

波浪袋方法—短暂转染大规模生产单克隆抗体

波浪袋转染用293Fectin.

准备: 在加入细胞前, 波浪袋必须充气.

注意: 波浪袋必须摇动, 否则加热器不加热，但开始时这种加热并不必要.

器材:
20 L的有螺丝帽锁住开口的袋子(工作体积 10 L)
自由式 293 培养基 Cat No 12338
Opti-MEMI Cat No 31985
2 毫克无内质粒DNA
3 毫升293 Fectin 试剂

转染前一天:
稀释细胞到 1.0X106个/毫升的浓度，以确保细胞处于对数生长期。

转染的当天:
1. 预热Opti-MEMI及自由式293 培养基到 37C.
2. 用预热的自由式 293培养基稀释细胞到最终容量变3L (暂时分装到 2 个烧瓶, 每个装 1.5L), 细胞的浓度为 1.0 X106 个细胞/毫升， 95%以上活细胞。
3. 试剂-A的准备: 加 2 毫克DNA 到 100毫升预热的Opti-MEMI. 轻轻混合.
4. 试剂-B的准备: 加 3 毫升 293Fectin 到 100 毫升预热的Opti-MEMI,轻轻混合.
5. 室温下培养不超过 5 分钟.
6. 5 分钟后,试剂-A 加到试剂-B里, 轻轻混合. 在室温下培养 30 分钟.
7. 30 分钟后, 加等量的试剂到 2 个烧瓶里, 轻轻混合. 然后通过螺丝帽口小心倒 3 L 进波浪袋.波浪袋给气含5-6%的CO2 置波浪袋于 7-7.5度的角度, 以17转/分开始启动.

第3天:
把 3L 预热的自由式 293 培养基通过入口泵入波浪袋, 并提高转速到18-19转/分(如果产生过多的泡沫，降低转速), 检查培养液的酸碱值–至少是6.8.

第6天:
把 3 L 预热的自由式 293 培养基通过入口泵入波浪袋, 增快转速到 20-22转/分 (如果产生过多的泡沫则降低转速), 测定培养液的酸碱值.

10天后通过0.2微米过滤器过滤收获含抗体的液体，最终容量约为 9.2L.

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