大规模的短暂转染293F 细胞以快速生产单克隆抗体

材料:
自由式293 培养基, Cat NO 12338
Opti-MEMI, Cat NO 31985
200微克无内质粒DNA
300 微升 293 Fectin 试剂

转染前一天:
把细胞稀释到10X106个细胞/毫升, 以确保这些细胞处于对数生长期。

转染当天：
1. 在37C中预热 Opti-MEMI 和自由式293培养基.
2. 用预热的自由式293 培养基稀释细胞到最终容积 300毫升,和细胞密度为1.0X106细胞/ 毫升。 95%以上的细胞必须是活的.
3. 试剂-A的准备: 加200 微克DNA 到10毫升预热的Opti=MEMI, 轻轻混合.
4. 试剂-B的准备: 加300 微升 293Fectin 到 10毫升预热的Opti-MEMI, 轻轻混合.
5. 室温下培养不超过 5 分钟.
6. 5 分钟后, 把试剂-A 加到试剂-B 里,轻轻混合. 在室温下培育30 分钟.
7. 30 分钟后, 把试剂混合物加到细胞中.

转染后第三天:
加 300毫升预热的自由式 293 培养基到烧瓶，最终容量为600 毫升.

转染后第六天:
1. 在 1000 转/分离心细胞 5 分钟. .收获过滤的上清液. 把细胞重新悬浮于同体积的预热的自由式 293 培养基, 储存细胞于 4C.
2. 最终容积是 600毫升- 收获 600毫升上清液.

转染后第十天:
用1000转/分离心细胞 5 分钟, 收获过滤的上清液. 从一次转染共收获1.2 升含抗体的上清液.

注意: 表达水平是以不同的抗体而异, 一般介于50-400 毫克/升的范围内.

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